《表1 实验所用qPCR的引物信息》

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《梁子湖和淤泥湖团头鲂体脂沉积差异比较》

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2) 梁子湖和淤泥湖脂代谢和生长基因转录水平的检测。从基因表达水平上检测脂代谢关键基因LEP和LPL以及生长基因IGF-1的转录表达量。将梁子湖和淤泥湖团头鲂各4尾在实验室暂养1d后进行样品采集，用MS-222（60mg/L）麻醉，无菌条件下分离脂肪、肝脏和肌肉组织样品，其中脂肪和肌肉组织的部分样品采用qRT-PCR技术，检测梁子湖和淤泥湖团头鲂LEP、LPL和IGF-1的相对表达量，首先根据GenBank中已报道的鲤科鱼类草鱼（Ctenopharyngodon idellus）和团头鲂LEP、LPL、IGF-1、NPY和β-actin cDNA的保守序列，利用在线生物软件设计荧光定量PCR引物（β-actin是跨一个内含子区设计引物），引物见表1。按试剂盒说明书依次提取总RNA，反转录获cDNA第一链，并进行qRT-PCR（ABI 7500型）。PCR反应体系为20μL，其中SYBRPremix Ex TaqTM（2×）10μL，上游引物（10μmol/L）0.4μL，下游引物（10μmol/L）0.4μL，ROX Reference DyeⅡ（50×）0.4μL，模板cDNA为1μL，加ddH2O至总体积为20μL。PCR程序为:95℃预变性30s；95℃5s，57℃34s，共计35个循环。每个样品3个平行，运用优化比较Ct（2-ΔΔCt）值来分析样品中基因mRNA相对表达量。