《表1 实验中所用引物信息》

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《一例异育银鲫(Carassius auratus gibelio)暴发性出血病病原分析》

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分别提取自然发病鱼、人工感染鱼、健康鱼组织以及感染CGB细胞的DNA，使用NanoDrop ND 2000测定DNA的浓度及纯度。CyHV-2的PCR检测方法参照文献（Goodwin et al，2006a；Jeffery et al，2007；Waltzek et al 2009；Sahoo et al，2016）的方法进行，根据世界动物卫生组织（OIE）上推荐引物（TK）用于检测CyHV-3，引物信息见表1。反应体系为50μL:DNA1μL，上下游引物（10μmol/L）各0.5μL，GoTaq?Master Mixes 25μL，灭菌超纯水23μL。扩增反应热循环参数为:95oC 2min，95oC 30s，退火30s（温度参照表1），72oC 30s，30个循环；72oC延伸10min。取5μL PCR产物在1%的琼脂糖凝胶中电泳观察结果。选取编号1—3的引物阳性扩增产物送南京金斯瑞公司测序，测序结果通过NCBI的Blast检索系统进行序列同源性分析。系统进化树依据DNA聚合酶基因部分氨基酸序列绘制，将测得的聚合酶基因序列翻译为氨基酸序列，并与GenBank数据库中其他疱疹病毒代表种的DNA聚合酶基因的氨基酸序列进行比较分析，多重比对采用ClustalW软件，用MEGA 7.0构建系统发育树。