《表1 实验所用引物及相关信息》

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《橄榄CaERF109和CaABR1基因的克隆及其表达特性分析》


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采用植物多糖多酚试剂盒E.Z.N.A.TM Plant RNA Kit(OMEGA bio-tek,美国)提取橄榄总RNA,经2.0%琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测合格后,采用Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit(Thermofisher,美国)逆转录成cDNA用于反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)扩增。以橄榄转录组数据库为参考,结合NCBI进行Blast序列比对,并设计引物进行CaERF109和CaABR1 cDNA序列的RT-PCR验证,所需引物序列及信息见表1。RT-PCR扩增体系和扩增程序参考文献(高敏霞等,2018)。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测后,切割可能的目的条带,采用EasyPure?Quick Gel Extraction Kit(TransGen Biotech,北京)回收并与pEASY?-T5 Zero Cloning Kit(TransGen Biotech,北京)连接,然后转化到大肠杆菌(Escherichia coli)Trans1-T1感受态细胞(TransGen Biotech,北京)中,在适宜条件下培养并挑取单克隆子进行PCR菌检,选取阳性克隆子送北京六合华大基因科技有限公司进行测序。