《表1 实验所用引物信息》

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《猪链球菌2型05ZYH33菌株具有N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性蛋白的鉴定及功能研究》


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注:下划线标注的碱基为酶切位点。

参照S.pneumoniae Str H的氨基酸序列对SS2 05ZYH33全基因组推导氨基酸序列进行BLAST分析,搜索SS2 05ZYH33中与Str H同源的氨基酸序列,采用ClustalX和ESPrip对两种茵的同源氨基酸序列进行比对分析。转化及构建突变体用的信息肽GE9(GNWGTWVEE)由哈尔滨博仕生物公司合成,纯度97%,溶于DMSO配制成5 mmol/L溶液。根据SS2 05ZYH33 ssu05_0630的基因序列和p AT18质粒的基因序列,采用Primer Premier 5软件设计引物:Ss GH20NcoⅠF/Ss GH20XhoⅠR引物扩增ssu05_0630基因的预测结构域(SsGH20)基因序列;up F/up XhoⅠR/dn Bam HⅠF/dn R引物分别扩增ssu05_0630基因的上游序列UP和下游序列DN;ErmF/ErmR引物扩增p AT18质粒中红霉素抗性基因(erm)片段;SeqF/SeqR引物鉴定阳性克隆和测序,全部引物由北京华大基因科技有限公司合成(表1)。