《表1 实验所用引物序列Tab.1 The primers used in this experiment》

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《魁蚶(Scapharca broughtonii)血红蛋白Ⅰ基因克隆及表达特征》

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根据本实验室转录组数据库中的已知序列，利用Primer Premier 5设计特异性引物SbHbⅠ-F和SbHbⅠ-R，扩增验证SbHbⅠcDNA的中间片段。使用RACE试剂盒（Clontech）进行RACE扩增，拼接扩增序列获得基因cDNA全长。根据扩增出的中间片段设计5?RACE（5Hb-R1和5Hb-R2）和3?RACE（3Hb-F1和3Hb-F2）引物，进行巢式扩增。第一轮使用试剂盒中的UPM和5Hb-R1与3Hb-F1进行扩增，以第一轮的扩增产物稀释30倍为模板，以NUP和5Hb-R2与3Hb-F2进行第二轮扩增。PCR反应程序:94℃30 s，72℃1 min，5个循环；94℃30 s，70℃30 s，72℃1 min，5个循环；94℃30 s，68℃30 s，72℃1 min，25个循环；4℃保存。所用引物见表1。