《表1 实验所用引物Tab.1 Primers used in this study》

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《烟草NtD14基因的遗传转化及其功能》

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利用CTAB法提取烟草叶片的总RNA。以cDNA为模板，用特异性引物（表1）扩增Nt D14基因片段并回收，并将该基因片段与pCAMBIA1302载体连接。Nt D14基因（GenBank登录号107816490）的ORF长度为804 bp，共编码267个氨基酸。利用限制性内切酶NcoⅠ和BstEⅡ对Nt D14目的片段和p CAMBIA1302载体进行双酶切反应，用DNA ligase Kit进行连接反应，重组载体命名为pCAM-BIA1302-Nt D14。将连接产物转化进大肠杆菌DH5α感受态细胞中，12 h后挑取大小均匀的单菌落分别经pCAMBIA1302载体通用引物、特异性引物进行PCR验证，并提取质粒进行双酶切检测，选取符合要求的阳性质粒送公司测序检测。