《表1 本研究用到的引物Tab.1 The primers used in this study》
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《三疣梭子蟹PtDNMT1基因的克隆及其在低盐适应中的表达分析》
根据本实验室转录组测序所得的PtDNMT1基因的片段，利用Primer Premier 5.0软件设计出2对3?RACE和5?RACE特异性引物，所有引物均由青岛擎科生物有限公司合成，序列等信息见表1。利用Trizol法提取健康三疣梭子蟹肌肉、鳃、肝胰腺组织的RNA，利用RACE模板合成试剂盒合成三疣梭子蟹RACE模板。3?和5?末端使用Advantage2 PCR Kit扩增，运用巢式PCR方法，第一轮反应使用引物Dt-3?-F，Dt-5?-F，分别与UPM配对，反应程序:95℃5 min，95℃30 s，63℃30 s，75℃2 min，30个循环。第二轮反应以第一轮PCR扩增产物为模板，使用引物Dt-3?-R和Dt-5?-R，分别与NUP配对，反应程序:95℃5 min，95℃30 s，63℃30 s，75℃2 min，30个循环。利用pMD18-T载体连接目的片段，然后利用DH5α感受态细胞，将连接液转入感受态细胞中，经过37℃活化1 h，然后进行涂板，经过12 h培养，挑菌摇床培养，M13引物检测菌液PCR，挑选所需的阳性单克隆，经过菌落PCR鉴定后，送青岛擎科生物有限公司测序。
| 图表编号 | XD0034464700 严禁用于非法目的 |
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| 绘制时间 | 2019.02.01 |
| 作者 | 环朋朋、吕建建、孙东方、高保全、刘萍 |
| 绘制单位 | 上海海洋大学水产与生命学院、农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所、农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所、青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室、上海海洋大学水产与生命学院、农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所、农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所、青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室、农业农村部海洋渔业可持续发 |
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