《表1 引物信息Tab.1 Primer sequences used in this study》

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《线纹海马Hippocampus erectus的tlr21基因结构及其对CpG-ODN的应答特征》

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解剖5只健康海马，分别取脑、鳃、性腺、肝、肠、肾、肌肉、育儿袋等8种组织，采用预冷的2×PBS洗涤3次，液氮保存。采用TRIzol抽提法（Thermo公司）获得总RNA。以总RNA为模板，利用PrimeScript?RT reagent Kit With gDNA Eraser反转录试剂盒（Toyobo公司）合成cDNA。参照线纹海马全基因组的tlr21参考序列，使用引物设计软件Primer premier 5.0分段设计引物（表1），进行PCR克隆，PCR程序为:94℃、5min预变性；94℃、40s，53℃、30s，72℃、45s，共34个循环；72℃延伸10min，4℃保存。对获得的PCR产物进行连接转，筛选之后送Introvigen公司测序，将获得的序列使用DNAman8进行序列比对，按片段顺序进行拼接，获得tlr21全长序列。