《表1 刺参13个SNP位点引物信息Tab.1 Information of 13 SNPs of A.japonicus》

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《刺参(Apostichopus japonicus)重要经济性状相关SNP标记的验证分析》

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自生长性状和抗病性状测定群体中各选取96个个体，采用（HRM）法（Reed et al，2007）进行SNP位点的PCR扩增和基因分型。10μl PCR反应体系:DNA模板1μl（50 ng/μl），4.5μl 2×ES Taq Master Mix，上下游引物各0.5μl（10μmol/L），3.5μl ddH2O；PCR反应程序:95℃预变性5 min；94℃变性30 s，退火30 s（退火温度见表1），72℃延伸30 s，共35个循环；最后72℃延伸7 min，4℃保存。用2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。向PCR产物中加入染料LC Green 1.0μl，高低温内标的正负向引物各0.25μl，95℃变性5 min后降温至4℃保存，利用Light Scanner进行基因分型，基因分型用程序为以0.1℃/s的速度从56℃快速升温到97℃，并以1次/s的密度采集荧光信号，得到熔解曲线，采集结束后用Light Scanner配套软件对熔解曲线进行分析（Ting et al，2014）。