《表1 实验中所用的引物序列Tab.1 Sequences of primers used in experiment》

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《大菱鲆(Scophthalmus maximus)蛋白质二硫键异构酶SmPDIA3的表达分析和功能验证》

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根据获得的中心片段序列设计PDIA3全长cDNA的3′和5′RACE特异性引物（表1）。以1.3.2中cDNA为模板，分别与引物UPM（long）配对进行3′与5′RACE第1轮PCR扩增。第1轮PCR反应体系:10×PCR Buffer 2.0μL，dNTP Mixture（10mmol/L）3.2μL，PDIA3-F1/PDIA3-R1（10μmol/L）0.8μL，UPM（long）0.8μL，LA Taq酶0.4μL，cDNA 0.4μL，加ddH2O补至20μL。反应条件为:预变性94°C，5min；变性94°C，30s；72°C，3min；循环5次。变性延伸94°C，30s；退火70°C，30s；延伸72°C，3min；循环5次。变性延伸94°C，30s；退火68°C，30s；延伸72°C，3min；循环25次。4°C保存。将第1轮PCR产物稀释10倍用作第2轮PCR的模板，UPM（short）替代UPM（long），PDIA3-F2/PDIA3-R2（10μmol/L）替代PDIA3-F1/PDIA3-R1（10μmol/L），其余组分均不变，反应条件与第一轮相同，余下步骤同1.3.3。