《表1 构建木聚糖酶-甘露聚糖酶融合基因的引物序列》

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《β-甘露聚糖酶Man5A和木聚糖酶Tlxyn11B的融合表达》

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以带有木聚糖酶Tl XYN11B编码基因Tlxyn11B的质粒p PIC9-Tlxyn11B为模板，以xyn11-F1和xyn11-R1为引物进行PCR扩增，获得木聚糖酶成熟区编码基因Tlxyn11B；以质粒p PIC9-man5A为模板，以man-F1和man-R1为引物进行PCR扩增，获得去除了CBM区的甘露聚糖酶基因man5A。PCR反应程序为：95℃保温5 min；95℃保温30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃保温10 min。引物序列见表1，下划线部分代表限制性酶切位点Eco RⅠ和NotⅠ，其中man-F1和xyn11-R1含有15 bp的同源序列以便于后续通过重叠延伸PCR进行木聚糖酶与甘露聚糖酶基因的融合。