《表1 q RT-PCR引物序列》

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《ACC处理对不同基因型玉米幼苗响应氮素供给的调控效应》

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取玉米幼苗氮素与ACC处理12 h后的根尖，将样品立即置于液氮中，后保存在-80℃冰箱中。采用艾德莱生物科技有限公司植物RNA快速提取试剂盒进行玉米总RNA的提取，置于-80℃冰箱中保存。采用Ta Ka Ra公司反转录试剂盒反转录成c DNA。反转录后的产物稀释10倍作为模板c DNA。使用Ta Ka Ra公司TB Green Reagerts荧光染料，采用ABI-7500 fast PCR仪进行Real-time PCR反应。以Zm Ubiquitin为内参，测定相关基因的表达量（表1）。反应体系为15μL，含TB Green 7.5μL，正向和反向引物各0.3μL，dd H2O 5.1μL，ROX Reference Dye II 0.3μL，c DNA模板1.5μL。采用两步法PCR反应程序。根据样品的特定荧光阈值下的Ct值，利用2–（35）（35）Ct计算方法计算得到不同样品的基因相对表达量。