《表1 本研究使用的引物编号和序列》

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《小麦主栽品种济麦22与良星99的基因组序列多态性比较分析》

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对济麦22与良星99基因组内的特有与共有CNV区间分别进行验证，选取区间内2000 bp左右长度的序列设计染色体区间特异的引物对CNV区间进行验证。扩增引物由在线软件Primer 3.0设计，其中引物长度范围为18～24 bp，GC含量范围在40%～60%之间，退火温度范围为54～60℃，扩增产物大小1～2kb （表1）。以济麦22、良星99与中国春的DNA为模板进行PCR扩增，通过有无目标扩增产物判断CNV是否存在。对与小麦株高相关的候选基因Traes CS-2D02G051500、Traes CS2D02G055700的序列差异SNP位点，设计出基因组特异引物（表1）进行PCR扩增并测序。PCR反应体系为20μL，包括10μL的2X M5 Hi Per plus Taq Hi Fi PCR mix，正、反向引物（10μmol L–1）各1μL，150 ngμL–1模板DNA 2μL，用dd H2O补至20μL。PCR扩增程序为95℃3 min；95℃30 s，56～57.4℃30～60 s （依引物退火温度以及目标序列而定），72℃2 min，35个循环；72℃5 min。