《表1 本研究使用的引物序列》

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《水稻OsPP1a基因克隆和RNAi-OsPP1a遗传转化分析》

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引物序列中下划线分别表示限制性内切酶位点；小写字母表示保护碱基。

OsPP1a DNA及cDNA片段PCR扩增，用引物OsPP1a F和OsPP1a R（表1），分别扩增得到3 432和969 bp大小的片段，连接pUCm T载体，转化大肠杆菌DH 5α，挑取单克隆PCR验证，并菌液培养，提取质粒送生工公司测序，测序结果比对水稻基因组碱基序列。构建RNAi载体，引物用RNAi F和RNAi R（表1），在引物序列前各加2个酶切位点，预扩增产物为341 bp条带，正反向都连接到pTCK303表达载体。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）用引物RT-PCR F及RT-PCR R（表1），PCR扩增的常规程序为:95°C 5 min（预变性）；95°C 15 s（变性），58°C 15 s（退火），72°C 30 s（延伸，20 bp·s-1），35个循环；72°C5 min（后延伸），4°C（保存）。各基因的引物和扩增的长度不同，退火温度及72°C延伸时间也随之变化。