《表1 本研究使用的引物及序列》

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《大花杓兰钙依赖蛋白激酶基因克隆及植物表达载体构建》

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加粗部分为相应的酶切位点，下划线部分为保护碱基

以大花杓兰根c DNA第一条链为模板，CDPK-core F和CDPK-coreR为引物（表1）。对Cm CDPK的核心序列进行PCR扩增。PCR反应体系（25μL):10×buffer with（NH4）2SO4 2.5μL，d NTPs 0.5μL，CDPK-core F和CDPK-core R各1μL，Mg Cl2 1.5μL，c DNA 1μL，DNA polymerase 0.5μL。PCR程序为：94℃3 min；94℃30 s，54℃30 s，72℃45 s，30个循环；72℃最后延伸7 min。1.5%琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，并切胶纯化目标条带，而后将其克隆到p GM-T vector（天根，北京），转化Escherichia coli TOP10感受态细胞。随机选取菌落PCR鉴定阳性的转化子5个，送上海生工进行测序，测序引物为载体通用引物T7。