《表1 硬化土模型参数：地黄RgCDPK基因的克隆与表达分析》

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《地黄RgCDPK基因的克隆与表达分析》

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以地黄组培苗转录组数据库中一条注释为CDPK的unigene全长序列为参考序列，使用Primer Premier 5设计特异性引物，具体见表1。PCR反应体系为20μL，具体组分如下:模板c DNA 2.0μL、2×Es Taq mix 10μL、上下游引物（Rg CDPK-F，Rg CDPK-R）各1.0μL、其余用dd H2O补足。反应程序设计如下:95℃，3 min；95℃，45s，58℃，45 s，72℃，2 min，35个循环；72℃延伸10 min。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测后，纯化回收得到目的片段，使用p MD19-T载体进行目的片段的连接后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，转化后产物于含氨苄青霉素的LB固体培养基上37℃培养过夜后筛选白斑，菌液经PCR验证后送至生工生物工程股份有限公司测序。