《表1 本文所用引物序列：毛木耳A交配型位点的克隆和序列结构分析》

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《毛木耳A交配型位点的克隆和序列结构分析》

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根据毛木耳杂交菌株APM2-16的菌丝体和成熟子实体的转录组序列信息，设计了一组交配型A因子同源序列的分子标记，通过APM2-16后代单核体群体的遗传连锁分析，发现分子标记A2和A4紧密连锁并定位于毛木耳连锁图的第9连锁群上（Zhou et al.2014；卢兴潮2015）。其中A4分子标记的引物A4F/A4R（表1）根据转录本comp32975-c0-seq1（注释信息为交配型基因）设计，用该对引物扩增单核体APP7，并通过测序对扩增产物进行序列验证。PCR扩增体系为：2μL APP7基因组DNA，引物各0.4μL（10μmol/L），2×Taq plus master mix（诺唯赞生物科技有限公司，南京）10μL，用dd H2O补足至20μL。反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s，56℃退火35s，72℃延伸（延伸时间由片段大小而定：1kb/min），共35个循环；最后72℃充分延伸10min。PCR反应在T100TM Thermal Cycler PCR扩增仪（Bio-Rad，USA）上进行。用pEASY?-T1 cloning vector（全式金生物技术有限公司，北京）进行PCR产物克隆，室温下反应10min后，将连接产物加入到100μL大肠杆菌感受态中，置于冰上0.5h，然后放入42℃水浴热激1min，置冰上冷却1min；加入无抗生素的LB液体培养基600μL，于37℃摇床振荡培养30min后，涂布于含100mg/L氨苄青霉素的LB固体培养基上，将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。用通用引物M13F和M13R扩增转化产物，选择两个阳性单克隆菌株，送至武汉擎科生物科技有限公司进行测序。