《表1 采用的引物及其序列》

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《云南玉溪冰糖橙果斑病致病菌的鉴定及室内药剂筛选》

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分离菌株培养7 d后，采用植物基因组DNA提取试剂盒（天根公司）提取DNA，对核糖体DNA内转录间隔区（ITS）基因、β–微管蛋白（tub2）基因、细胞延伸因子基因（EF1–α）、线粒体小亚基核糖体DNA（SSU）、肌动蛋白基因（ACT）序列进行扩增，引物（表1）由华大基因公司合成。50μL PCR反应体系：0.4μmol/L引物、3 ng总DNA模板和25μL2XT5Super PCR Mix，用双蒸水补充至50μL。扩增程序：98℃预变性2 min；98℃变性10 s，55℃退火10 s，72℃延伸10 s，最后72℃补充延伸2 min。4℃保存，PCR扩增产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，后送华大基因公司测序。将序列提交至NCBI数据库（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）中进行比对分析，运用MEGA7.0软件邻近法进行聚类分析，构建系统进化树（1 000次重复）。