《表1 候选基因的引物序列及其退火温度》

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《尼罗罗非鱼幼鱼对亚硝酸盐氮长期胁迫的生理功能响应》

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养殖21 d后，禁食12 h，每桶随机捞取幼鱼3尾，每组共9尾，将鱼迅速投入质量浓度为50 mg/L的MS-222中麻醉，解剖鱼体并采集肝脏组织0.1～0.2 g，采用TRIzol试剂（Invitrogen，美国）提取尼罗罗非鱼幼鱼肝脏组织总RNA，通过1%的琼脂糖凝胶电泳与紫外分光光度计Nano DropLite （Thermo Scientific，美国）分别测定纯度和浓度。取1μg RNA使用Prime Script TM逆转录试剂盒（Ta Ka Ra）合成c DNA，保存于–20℃。以肌动蛋白β-actin为参照基因，设计选取细胞白介素IL-1β、IL-6，肿瘤坏死因子TNF-α、热休克蛋白HSP70和溶菌酶LYS基因作为肝脏免疫候选基因，使用生物软件Primer Premier 5.0软件设计特异性引物，引物序列信息见表1，将引物序列委托生工生物有限公司（上海）进行合成。