《表1 15个微卫星位点的引物序列及其退火温度》

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《一例雉科鸟类跨属杂交及其亲本物种的鉴定》


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注:PC位点选用自Hale等[19],其余MCW位点选自包文斌等[20]研究数据

从Hale等[19]和包文斌等[20]报道的位点中挑选能够用于鸡形目的微卫星位点及引物,经过实验验证,获得能够稳定扩增蓝孔雀和贵妃鸡的微卫星引物15对(表1),其中每对引物的上游引物的5'端进行FAM(蓝色)、JOE(绿色)、TAMRA(黑色) 3种荧光标记。扩增后对PCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳检测,将成功扩增的产物送至上海生工生物科技有限公司,利用ABI3130遗传分析仪进行毛细管电泳,最终获得各位点基因分型数据。PCR反应总体积为15μL,其中:模板DNA(20 ng/μL)1.5μL,Trans StartTop Taq DNA聚合酶0.3μL,上下游引物(10μmol/L)各0.3μL,10×Trans StartTop Taq buffer 1.5μL,2.5 mmol/L d NTPs 1.2μL,用灭菌后的超纯水补足体积。PCR扩增程序为:95℃预变性5 min,94℃变性30 s,退火30 s(退火温度Ta见表1),72℃延伸30 s,扩增35个循环,最后72℃延伸10 min。