《表1 所用引物序列及其退火温度》

《表1 所用引物序列及其退火温度》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《辽宁省梨黑点炭疽病的病原鉴定及致病性研究》


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将供试菌株PCG1和PCG2在PDA培养基上培养5 d,收集菌丝体置于1.5 mL离心管中,采用CTAB法提取分离株DNA,置于-20℃冰箱中备用。对供试菌株的ITS、ACT、GAPDH、TUB2和CAL基因进行扩增与测序,引物[5-8]由上海生物工程技术服务有限公司合成(表1)。50μL PCR反应体系:2×Es Taq Master Mix 25μL、总DNA模板2μL、10μmol/L上下游引物各2μL、ddH2O 19μL。PCR反应条件为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,退火60 s(各引物退火温度见表1),72℃延伸1 min,共35个循环;最后72℃延伸10 min。PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶检测后,送往生物工程(上海)股份有限公司测序。