《表1 设计的PCR引物及其序列》

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《百合鳞茎发育过程中淀粉合成相关酶基因的克隆及表达分析》

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采用同源克隆的方法，根据已经报道的其他作物AG-Pase、GBSS和SSS基因cDNA序列，首先分别寻找这三个基因的近缘物种完整开放阅读框，然后在Blastn上根据此开放阅读框进行比对，将所有相关物种的开放阅读框序列录入，使用MegAlign软件进行整体比对，选择相似性最接近的区域设计简并引物，最终设计可以扩增出百合AGPase、GBSS和SSS基因的简并引物（表1）。采用Trizol法提取各组织的RNA，用DNase I，RNase-free去除RNA中的DNA，反转录生成cDNA链；利用简并引物进行PCR扩增，对扩增片段进行凝胶回收，将片段与pGEM-T载体连接，并转化大肠杆菌TOP10感受态进行阳性克隆筛选，再对阳性克隆进行菌液PCR鉴定，选取正确的克隆测序。