《表3 不同酶种类和酶解时间条件下四分体胼胝质的酶解效率》

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《巴西橡胶树小孢子单细胞显微分离研究》

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小孢子母细胞发育到减数分裂后期，胼胝质包裹着四分体。试验发现若要得到小孢子单细胞，通过物理手段难以实现。本研究对4种酶液在不同温度及时间条件下的巴西橡胶树雄花四分体胼胝质的酶解效果进行探索，结果见表3和图3。从表3可见，同种酶液在相同的酶解时间内，温度对四分体胼胝质的酶解情况影响不大。图3展示的是37℃条件下4种酶液在不同时间内对四分体胼胝质的酶解情况。综合分析表3和图3可知，（1）酶解1 h时，5%纤维素酶与4%果胶酶混合酶完全酶解四分体胼胝质，释放出小孢子单细胞，酶解率为100%（图3A），其余3种酶液均未释放出小孢子单细胞；其中，5%纤维素酶开始酶解四分体外围胼胝质，酶解率约为65%～75%（图3B），而5%果胶酶、5%β-葡聚糖酶均未酶解胼胝质，酶解率为0（图3C、D）。（2）酶解3 h时，5%纤维素酶基本酶解四分体外围胼胝质，酶解率约为88%～90%；5%果胶酶开始起作用，出现释放小孢子单细胞现象，酶解率约为25%～32%；5%β-葡聚糖酶未酶解胼胝质，酶解率为0（图3E～G）。（3）酶解6 h时，5%纤维素酶完全酶解掉外围胼胝质，酶解率达到95%～98%，但四分体的4个小孢子单细胞仍然相连；5%果胶酶酶解释放出多个小孢子单细胞，但仍有胼胝质残留，酶解率约80%～85%；5%β-葡聚糖酶的酶解率仅有20%～25%，可使胼胝质层变薄，但不能释放出小孢子单细胞（图3H～J）。研究结果表明：在37℃条件下，采用5%纤维素酶与4%果胶酶混合酶，酶解时间为1 h时是酶解巴西橡胶树雄花四分体胼胝质的最佳方案。在适宜温度内，橡胶树四分体胼胝质的酶解效果与酶液种类与酶解时间有关，其酶解效率见表3。