《表1 用于半定量RT-PCR和qRT-PCR的引物》
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《Bmo-miR-2788对家蚕丝胶蛋白基因Ser-1的表达调控(英文)》
BmSer-1 3′-UTR fragment has a length of about300 bp amplified from the genomic DNA of silkworm by PCR.PCR cycling conditions were as follows:initial denaturation at 94℃for 4 min,25 cycles of 94℃for 30 s,55℃for 30 s and 72℃for 45 s,and final extension at 72℃for 5 min.PCR products were separated by electrophoresis with 1%agarose gel.After purification,the gene fragment containingBmSer-1promoter,egfpORF andBmSer-1 3′-UTR was cloned into pMD19-T vector and sequenced.InsertedBmSer-13′-UTR fragment in pMD19-T was cleaved byXbaⅠandFseⅠand ligated into pGL3.0(A3-luc-SV40)plasmid(previously digested by the same restriction enzymes)to construct pGL3.0(A3-luc-BmSer-1-3′-UTR-SV40).In order to construct Bmo-miRNA expression vector pcDNA3.0(ie1-egfp-pri-Bmo-miR-2788-SV40),nucleotide sequences of mature Bmo-miRNA,BmomiR-2788 and their flanking regions(±100 bp)were cloned into the pCDNA3.0 plasmid downstream ofegfp gene controlled byB.morinucleopolyhedrovirus(BmNPV)ie1 promoter.Then,structure of obtained vectors was confirmed by sequencing(Sangon Biotech).
图表编号 | XD00129993000 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.12.01 |
作者 | Rehana Kandhro、陈艳花、钱平、朱娟、沈兴家 |
绘制单位 | 江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室、中国农业科学院蚕业研究所农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室、江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室、中国农业科学院蚕业研究所农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室、江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室、中国农业科学院蚕业研究所农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室、江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室、中国农业科学院蚕业研究所农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室、江苏科技大学生物技术学院江苏省 |
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