《表1 用于qRT-PCR的引物序列》

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《人脐带间充质干细胞经添加B27的无血清培养基诱导后分化成神经元样细胞》

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用qRT-PCR检测巢蛋白（Nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、人重肽神经丝蛋白（NEFH）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。收集细胞样本，加入TRIzol试剂（Invitrogen，Carlsbad，CA，USA）提取每个样本的总RNA。使用BestarqPCR RT试剂盒（DBI，Shanghai，China），按照制造商的规范进行逆转录。以2μg总RNA为模板，总反应混合物体系为20μL。配制反应液，在65℃下孵育5 min，然后在冰上冷却。37℃孵育60 min，98℃孵育10 min，然后合成第一链cDNA并收集检测。qRT-PCR扩增反应混合物体积为20μL(Bestar Sybr Green qPCR master Mix，DBI）。用Agilent Stratagene荧光定量PCR仪Mx3000P进行qRT-PCR实验。反应条件如下：94℃2 min，94℃20 s，58℃20 s，72℃20 s；40个周期（表1）。所有mRNA的表达均对照GAPDH mRNA的表达进行归一化。实验重复3次。所有数据均采用2-△△Ct方法进行处理。