《表1 防御相关基因的特异性引物》

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《棉花内生真菌CEF-373菌株对棉花黄萎病的防效及其作用机理》

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鲁棉研21号的种植方法同1.2.3，待1片真叶初现时每钵灌根接种1×107CFU/mL菌株CEF-373分生孢子悬浮液10 mL，以10 mL察氏培养基灌根为对照，4 d后再接种1×107CFU/mL菌株Vd080分生孢子悬浮液10 mL，接种后12、24、48和72 h采集棉花叶片进行后续试验。采用CTAB/酸酚法提取棉花叶片总RNA（蒋建雄和张天真，2003），利用Reverse Transcriptase M-MLV反转录制备cDNA，具体操作按照说明书进行。利用PCR技术检测棉花叶片中防御相关基因PPO、POD、PAL、CHI、RP10的表达量，以Ubiquitin基因为内参基因，所用特异性引物均由苏州金唯智生物科技有限公司合成（表1）。20μL PCR反应体系：10μmol/L上下游引物各0.4μL、cD-NA 2μL、2×Ultra SYBR Mixture（with ROX）10μL，无菌水补足至20μL。PCR反应程序：95℃预变性10 min；95℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，共40个循环。熔解曲线程序设定为95℃预变性5 s；65℃延伸1 min；65℃上升到97℃解链，每0.11 s上升1℃。试验重复3次，每次设3个技术重复，采用2-??Ct法对所得Ct值进行分析（张芸等，2016）。