《表1 葡萄果实抗病相关基因特异性引物序列》

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《"2,4-表油菜素内酯对葡萄果实采后灰霉病的抑制作用机理"》

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选择葡萄果实的VvCHI、VvGNS和VvPAL-like 3个抗病相关基因进行qPCR测定，其特异性引物根据NCBI设计得到（表1）。不同基因的表达水平用SYBR?Premix Ex Taq?试剂盒进行测定，所用cDNA经过5倍体积稀释后取2μL加入到20μL反应体系中。将Quant Studio?Real-Time PCR仪器程序设置为：初始反应95℃、30 s，而后经过95℃5 s、60℃34 s的40个循环，最后通过95℃15 s、60℃1 min、95℃15 s终止反应。通过稀释法分析最终扩增产物的熔解曲线来评价引物的特异性。将反应结果用阈值周期（Ct值）进行归一化处理，用2-ΔΔCt法[29]来表示目标基因相对于管家基因（VvActin）的相对表达水平。