《蛋白质顺序分析技术》

目录1

第一章 序言1

一、蛋白质顺序分析的意义1

二、历史回顾与现状2

三、展望10

第二章 蛋白质顺序测定的一般方法、步骤和基本战略14

一、蛋白质的肽链结构14

（一）蛋白质的结构单位——氨基酸14

（二）蛋白质顺序的含意17

二、样品的纯度要求18

三、顺序测定的一般方法和步骤19

（一）顺序测定前的准备19

（二）二硫键的断裂19

（三）顺序测定的一般方法和步骤21

四、顺序测定的基本战略22

（一）氨基酸自动分析仪的一般构造及功能25

二、氨基酸自动分析的原理及有关仪器简介25

一、引言25

第三章 氨基酸组成分析25

（二）氨基酸自动分析的原理28

三、蛋白质样品的水解处理33

（一）盐酸水解法34

（二）磺酸水解法37

（三）碱水解法39

（四）酶水解法39

四、氨基酸组成分析的误差纠正39

五、氨基酸残基数的计算40

第四章 蛋白质的裂解44

一、引言44

二、蛋白质的酶裂解44

（一）简述44

（二）几种常用的肽链裂解酶45

（三）近年来发现的几种高特异性的肽链内切酶50

（四）实验方法52

三、蛋白质的化学裂解54

（一）溴化氰裂解55

（二）羟胺裂解57

（三）色氨酸位点的裂解59

（四）部分酸水解61

第五章 肽段的分离纯化65

一、引言65

二、凝胶过滤层析65

（一）基本原理65

（二）凝胶的类型67

（三）实验方法69

（一）一般原理74

三、离子交换层析74

（二）离子交换剂的种类75

（三）实验方法80

四、肽的薄膜层析分离83

（一）基本原理和一般情况介绍83

（二）实验方法85

五、SDS凝胶电泳86

（一）FDNB分析法89

一、N末端测定89

第六章 末端氨基酸残基的测定89

（二）DNS析法95

（三）Fdman降解法97

（四）DABITC法97

（五）氨肽酶法97

（六）N末端氨基受封闭时的测定98

二、C末端测定102

（一）肼解法102

（三）C末端选择性氚标记法104

（二）乙内酰硫脲法104

（四）减数C末端测定105

（五）还原法106

（六）羧肽酶法106

第七章 手工微量顺序测定技术111

一、手工Edman化学降解法111

（一）原理111

（二）实验方法113

（三）PTH-氨基酸的鉴定114

二、DNS-Edman测顺序法120

三、减数Edman测顺序法121

四、DABITC/PITC双偶合法122

（一）引言122

（二）原理123

（三）实验方法124

五、氨肽酶降解法129

第八章 固相顺序分析技术133

一、载体的选择及制备133

（一）载体的选择133

（二）载体的制备136

二、固定蛋白质或多肽的原理及方法137

（一）对苯二异硫氰酸（DITC）法137

（二）高丝氨酸内酯法141

（三）水溶性碳二亚胺（FDC）法144

三、双偶合法在手工固相顺序测定中的应用146

（一）用EDC方法固定胰岛素A链146

（三）TLC鉴定及结果147

（二）双偶合手工固相法顺序测定147

四、固相法测顺序的优缺点149

（一）固相法的优缺点149

（二）固相法测顺序的战略运用149

第九章 蛋白质自动顺序分析仪155

一、自动液相顺序分析仪155

（一）引言155

（二）液相顺序仪的一般构造原理156

（三）蛋白质和小肽样品在液相顺序仪中的降解157

（四）携带体Polybrene引入反应杯158

二、自动固相顺序仪159

（一）引言159

（二）固相顺序仪的一般构造原理159

（三）固相顺序仪的微量顺序分析161

三、气相顺序仪162

（一）引言162

（二）气相顺序仪的一般构造原理165

一、引言167

二、高效液相色谱仪的一般构造原理167

第十章 高效液相色谱在蛋白质顺序分析中的应用167

三、利用高效液相色谱技术分离纯化蛋白质和多肽172

（一）一般说明172

（二）应用示例175

四、Edman降解产物的高效液相色谱180

（一）PTH-氨基酸高效液相色谱180

（二）DABTH-氨基酸高效液相色谱185

（三）DNS-氨基酸的超微量高效液相色谱186

一、引言189

第十一章 顺序分析技术在异常血红蛋白结构研究中的应用189

二、异常血红蛋白化学结构分析194

（一）血液标本的采集和溶血液的制备194

（二）珠蛋白的制备195

（三）异常肽链的分离及其氨乙基化195

（四）胰蛋白酶水解196

（五）酶解片段肽的分离199

（六）异常肽的二次酶解和分离203

（七）不溶性胰蛋白酶酶解肽的处理203

（八）异常肽的氨基酸组成分析和氨基酸顺序测定204

附录一 常用英文名字缩写205

附录二 部分试剂和溶剂的纯化206

附录三 氨基酸的一些物理常数207

附录四 缓冲溶液的配制209

（一）几种特殊缓冲液的配制209

（二）常用缓冲液的配制209

（三）标准缓冲液的配制214

附录五 常用数据表215

（一）某些有机溶剂的主要物理常数215

（三）常用固态化合物的当量浓度（或md浓度）配制参考表216

（二）实验室中常用酸碱的比重和浓度的关系216

（四）常用酸碱的强度217

附录六 硫酸铵饱和度常用表218

（一）调整硫酸铵溶液饱和度计算表218

（二）调整硫酸铵溶液饱和度计算表218

（三）不同温度下的饱和硫酸铵溶液219

附录七 冷却剂和干燥剂220

（一）冷却剂220

（二）干燥剂220