《蛋白质分子基础》求取 ⇩

第一章 绪言1

一、蛋白质在生物体内的重要作用1

二、生物化学与分子生物学2

三、新技术的采用促进了生命科学的发展2

四、蛋白质的应用与现实生活3

第二章 蛋白质的组成5

第一节 氨基酸5

一、氨基酸的构型8

二、氨基酸的酸碱性质与pK值10

三、氨基酸的反应14

第二节 蛋白质的其它组分17

习题18

参考文献18

第一节 蛋白质的酸碱性质20

第三章 蛋白质的分离、提纯与纯度标准20

第二节 蛋白质提纯的一般方法22

第三节 材料的选择与处理24

一、材料的选择24

二、细胞破碎的方法25

三、抽提26

第四节 蛋白质的初步提纯27

一、蛋白质性质上差异的利用27

二、沉淀技术28

三、透析与浓缩32

第五节 蛋白质的进一步提纯34

一、层析方法的一般原理34

二、分配层析37

三、逆流分配39

四、吸附层析41

五、离子交换层析43

六、凝胶过滤54

七、亲和层析64

八、超离心法69

九、电泳法75

十、蛋白质的结晶87

第六节 纯化步骤的顺序编排88

第七节 提纯过程中的定量89

一、分光光度测定法的原理89

二、蛋白质浓度的测定92

第八节 纯度标准93

习题95

参考文献95

第四章 蛋白质分子量的测定98

第一节 分子量的平均值98

第二节 最小二乘法的应用99

第三节 超离心沉降速度法101

一、凝胶柱层析测定分子量103

第四节 沉降平衡法103

第五节 凝胶色谱法(凝胶层析法)测定分子量103

二、凝胶薄板层析测定分子量105

第六节 十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳法106

习题106

参考文献108

第五章 蛋白质一级结构的测定109

第一节 蛋白质一级结构研究的程序109

第二节 蛋白质和肽的氨基酸组成的测定110

一、蛋白质的水解110

二、氨基酸的定性分析111

三、氨基酸的柱层析定量测定112

第三节 蛋白质中特殊基团的测定113

一、色氨酸的测定114

二、巯基测定114

三、二硫键的测定116

四、氨基和酰胺基的测定117

第四节 蛋白质和肽的末端测定118

一、N-末端的测定118

二、C-末端的测定121

第五节 蛋白质中肽链的拆离和分离提纯122

一、温和条件下拆离亚单位122

二、二硫键的拆开122

三、肽链的鉴定及分离123

第六节 肽链的部分裂解及肽片段的分离123

一、肽链的部分裂解123

二、肽链部分裂解后肽片段的分离127

第七节 肽段氨基酸排列顺序的测定128

一、苯异硫氰降解法(Edman降解法)128

二、DNS-Cl-Edman方法130

四、酶解法测定顺序131

三、蛋白质顺序测定仪131

第八节 从已知顺序肽段复现肽链的一级结构132

一、N-端基肽段的确定132

二、C-端基肽段的确定133

三、重迭肽133

第九节 蛋白质分子中二硫桥及酰胺基位置的确定134

一、二硫桥位置的确定134

二、酰胺基位置的确定134

第十节 蛋白质一级结构测定的实例135

一、胰岛素一级结构的测定135

二、巴氏梭菌固氮酶组分--铁蛋白的氨基酸排列顺序137

第十一节 蛋白质一级结构研究展望139

第十二节 蛋白质的一级结构与生物进化139

习题141

参考文献142

第一节 液相合成法的基本原理143

第六章 蛋白质的化学合成143

一、基团的保护144

二、酰胺键形成的缩合反应146

三、胰岛素的液相合成147

四、RNA酶的液相合成150

第二节 固相合成法的基本原理150

习题153

参考文献153

第七章 蛋白质的化学修饰154

第一节 化学修饰的原理154

一、影响蛋白质功能基反应性的各因素154

二、有关蛋白质功能基反应性的几个问题156

三、修饰剂反应性的决定因素159

第二节 化学修饰的方法学160

一、蛋白质修饰试剂和修饰条件的选择161

二、修饰程度和修饰部位的测定162

第三节 蛋白质侧链的修饰163

第四节 亲和标记171

第五节 光化学标记172

第六节 敏化光氧化173

第七节 双功能试剂173

第八节 化学修饰的某些应用175

习题176

参考文献176

第八章 蛋白质分子构象178

第一节 引言178

第二节 维持蛋白质分子构象的化学键179

一、氢键179

二、疏水键181

三、范德华引力181

四、离子键181

第三节 X-射线结构分析的基本原理182

五、配位键182

六、二硫键182

一、晶体结构的基本知识183

二、X-射线结构分析的基本原理184

三、单晶回转法基本原理187

第四节 蛋白质分子的二、三级结构189

一、蛋白质的立体结构原理189

二、球蛋白分子的二、三级结构198

第五节 蛋白质分子的四级结构216

一、基本概念216

二、亚单位之间的结合力216

三、四级结构217

第六节 纤维状蛋白的构象221

一、a-角蛋白组221

三、胶原组222

二、丝心蛋白组222

思考题223

参考文献224

第九章 溶液中蛋白质分子构象的研究方法及蛋白质变性225

第一节 溶液中蛋白质分子构象的研究方法225

一、紫外吸收法225

二、萤光光谱法227

三、旋光色散和圆二色性231

四、三种新技术的简单介绍236

1.核磁共振236

2.激光拉曼光谱238

3.中子衍射238

第二节 蛋白质的变性239

一、蛋白质变性的基本概念239

二、各种变性因素对蛋白质构象的影响241

四、复性248

三、变性产物的构象248

五、抗变性手段249

思考题250

参考文献251

第十章 蛋白质分子构象与功能的关系252

第一节 血红蛋白分子构象与功能的关系252

一、血红蛋白的变构作用与O2的运输253

二、DPG对血红蛋白氧亲和力的影响255

三、H+浓度、CO2分压对血红蛋白氧亲和力的影响256

四、血红蛋白分子病258

第二节 细胞色素c分子构象与功能的关系260

思考题262

参考文献262

三、分子聚合263

二、分子杂交263

一、亚单位的聚合与解离263

第一节 蛋白质分子相互作用概述263

第十一章 蛋白质分子相互作用263

四、分子识别266

五、自装配266

六、多酶复合物266

七、非酶蛋白改变寡聚酶的专一性267

八、双功能寡聚酶267

第二节 肌肉收缩的分子机理268

一、肌原纤维的结构268

二、粗丝结构270

三、细丝结构271

四、肌肉收缩的分子机理272

第三节 血液凝固的分子机理273

一、凝血因子273

二、血液凝固的分子机理273

第四节 抗体与抗原、补体的相互作用280

一、IgG和IgM的结构281

二、抗原与抗体的相互作用286

三、补体的激活286

思考题288

参考文献288

第十二章 酶的结构与活性290

第一节 酶催化活性的结构基础290

一、活性部位290

二、催化部位与底物结合部位292

三、活性部位的研究方法297

四、别构部位303

五、酶的专一性与诱导契合理论304

六、酶原激活310

七、同工酶312

一、过渡态与活化能313

第二节 酶的催化机制313

二、微观可逆性315

三、降低活化自由能的几个因素315

四、酶催化反应机制的实例321

习题328

参考文献328

第十三章 酶催化反应动力学330

第一节 酶催化反应初速的测定330

一、反应速度330

二、酶对催化反应速度的影响331

三、初速的测定332

第二节 底物浓度对催化反应速度的影响334

一、中心复合物的存在334

二、单底物-单产物系统(S？P系统)335

三、双底物双产物反应350

一、酶浓度与反应初速的关系360

第三节 酶浓度与催化反应速度360

二、两个实际问题364

第四节 抑制剂和活化剂对催化反应速度的影响366

一、竞争性抑制367

二、非竞争性抑制剂369

三、反竞争性抑制371

四、线性混合型抑制372

五、酶催化反应的活化剂375

第五节 pH对酶催化反应速度的影响377

一、pH对酶稳定性的影响377

二、pH与催化反应速度379

第六节 温度对酶催化反应速度的影响384

一、酶的热稳定性与最适温度384

二、酶催化反应的温度系数Q10384

一、催化反应速度与底物浓度的双曲线及S形曲线386

第七节 变构酶(别构酶)与协同性386

二、简化的变构酶的速度方程--Hill方程388

三、M.W.C.模型390

四、Koshland序变模型(KNF理论)394

习题395

参考文献399

第十四章 辅酶400

一、与转移氢(电子)有关的辅酶(氧化还原反应的辅酶)400

二、与其他基团(除氢而外)转移有关的辅酶405

参考文献413

附录一、蛋白质的存在与分类414

附录二、酶的命名和分类417

附录三、固体硫铵添加量与浓度(%饱和度)的关系420

附录四、离子交换树脂421

附录五、Whatman离子交换纤维素的有关数据422

附录六、DNP氨基酸纸层析几种常用试剂423

附录七、分离DNS氨基酸用的溶剂系统424