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目录1

第一章蛋白质的透析、冷冻干燥及一些基本分析方法1

任梅轩1

一、样品处理1

（一）透析1

（二）冷冻干燥2

二、分析方法3

（一）灰分测定3

（三）总氮量的测定4

（二）水分测定4

（四）酰胺氮的测定8

（五）蛋白质浓度的测定11

1．缩脲法12

2．Folin－酚试剂法14

3．紫外吸收法16

第二章蛋白质、多肽及氨基酸的显色反应16

潘家秀徐俊杰任梅轩16

一、纸上显色法16

（一）茚三酮法16

（二）吲？醌法18

（四）氯气显色法20

（三）pH指示剂显色法20

（五）个别氨基酸的特殊显色法22

1．甘氨酸的显色22

2．酪氨酸的显色22

3．组氨酸、酪氨酸及它们的多肽的显色24

4．精氨酸的显色24

5．半胱氨酸及胱氨酸的显色24

6．脯氨酸的显色24

（六）蛋白质的特殊显色法24

1．蛋白质的显色法24

2．脂蛋白的显色法24

（一）茚三酮溶液显色法27

3．醣蛋白的显色法27

二、溶液显色法27

（二）Folin－酚试剂显色法28

（三）直接光谱测定法29

1．肽键测定法29

2．酪氨酸和色氨酸测定法30

（四）色氨酸的测定30

第三章蛋白质及多肽的氨基酸分析34

潘家秀徐俊杰任梅轩戚正武34

一、绪言34

2．影响氨基酸Rf值的几种主要因素35

1．层析的机制35

二、滤纸层析法35

（一）基本原理35

3．影响层析斑点、形状、大小和溶剂前沿的几种因素51

（二）室温滤纸层析法51

1．样品处理及点样51

2．溶剂系统51

（三）高温滤纸层析法58

（四）小纸快速层析（小层析）59

（五）定性检定和定量比色测定61

3．单向和双向层析61

三、高压电泳高温层析双向纸上分离法63

（一）操作步骤63

1．高压电泳63

2．高温层析65

（二）讨论65

四、二硝基氟苯法66

（一）原理66

3．DNP－氨基酸的抽提67

2．二硝基氟苯作用67

4．二硝基酚（DNP-OH）的去除67

（二）实验部分67

1．水解与水解液处理67

5．DNP－氨基酸的检定71

6．改正因数的测定71

（三）计算71

五、氨基酸柱层析定量分析法71

（一）原理71

3．样品的处理、上柱和收集72

5．树脂再生72

4．定量测定步骤72

2．缓冲液的配制72

1．树脂的浮选、处理和装柱72

（二）实验部分72

（三）实验结果计算81

（四）讨论86

第四章蛋白质及多肽的末端分析技术95

任梅轩95

序言95

一、N－端测定96

（一）二硝基氟苯法（FDNB法）96

1．原理96

2．二硝基氟苯（FDNB）的制备110

2．异硫氰酸苯酯的制备113

3．苯乙内酰硫脲氨基酸（简称PTH－氨基酸）的制备113

1．原理113

（二）异硫氰酸苯酯法（PTH法）113

4．苯氨基硫甲酰蛋白或肽（简称PTC－蛋白或肽）的生成113

5．PTC－蛋白或肽的环化作用113

6．苯乙内酰硫脲氨基酸的鉴定113

7．N－末端计算方法及回收率113

6．DNP－氨基酸的鉴定113

5．DNP－蛋白的水解及DNP－氨基酸的抽提113

4．DNP－蛋白的制备113

3．DNP－氨基酸的制备113

8．实例113

1．原理119

3．肼解步骤119

2．无水肼的制备119

4．回收率119

（一）肼解法119

二、C－端测定119

7．实例119

5．实例124

（二）羧肽酶法124

1．原理124

2．羧肽酶的制备124

3．羧肽酶的重结晶与二异丙氟磷酯（DFP）处理124

4．测定方法124

5．实例135

第五章区带电泳135

潘家秀张友尚135

一、区带电泳135

（一）绪言135

1．基本原理136

（二）区带电泳的分类和比较138

2．电泳的分类138

（一）绪言142

二、高压纸上电泳142

（二）装置143

1．高压电源148

3．样品处理150

5．电泳150

4．点样150

6．烘干150

2．纸的选择和裁剪150

1．缓冲液的选择与配制150

（三）操作步骤150

2．电泳器150

7．显色158

（四）关于区带异常现象的分析158

（五）示例158

三、粉末电泳162

（一）淀粉平板电泳162

1．绪言162

2．操作步骤162

3．分离示例166

（二）纤维素粉平板电泳166

1．绪言166

2．纤维素粉板的制备和操作步骤166

四、琼脂平板电泳167

（一）绪言167

3．分离示例167

（二）装置168

（三）操作步骤169

1．琼脂的净化169

2．制板169

3．缓冲液的选择与配制169

7．电泳176

9．制备电泳176

8．区带检出176

（四）讨论176

6．电压的选择176

5．加样方法176

4．样品的处理176

第六章逆流分溶180

戚正武徐俊杰180

一、绪言180

二、基本原理181

三、逆流分溶的理论曲线184

四、影响分溶理论曲线的几个因素186

（一）K值186

（二）分离因子β186

（三）容积因子α187

（四）曲线相对宽度△r相对188

（五）转移次数190

（六）偏差因素191

（一）基本操作法193

五、逆流分溶的操作方法193

（二）单提取法194

（三）轮转法194

（四）方块法195

（五）逐段法196

六、逆流分溶仪197

七、溶剂系统和实验温度的选择202

（一）溶剂系统的选择202

（二）温度的选择203

八、实验步骤211

（一）溶剂系统的配制211

（二）分溶管的洗滌211

（三）下相溶剂的加入211

（六）振荡次数、定清时间和转移次数的选择212

（四）预行212

（五）样品的加入212

（七）测定方法213

（八）样品的回收214

（九）分溶管的洗滌215

（十）分溶曲线的绘制及计算215

九、实例216

（一）逆流分溶法作为分离之用216

（二）逆流分溶法作为分析之用217

（三）分子量的测定225

十、逆流分溶法的特点和应用范围226

附录1酸碱指示剂229

附录2缓冲液之配制方法230

附录3氨基酸的一些物理常数表236