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第一章 光谱技术1

第壹节 分子的能级和分子光谱1

第一篇生物化学检验基本技术1

第贰节 可见、紫外吸收光谱法2

一、可见、紫外吸收光谱2

(壹) 电子跃迁和吸收带2

(贰) 吸收光谱和溶剂效应3

(壹) Lamber-Beer定律的表达式5

(贰) 吸光系数5

二、光吸收的基本定律——Lamber-Beer定律5

(叁) 偏离Beer定律的因素6

三、比色法7

(贰) 有色溶液对不同波长光线的吸收7

(叁) 显色反应及其条件7

(肆) 比色方法和光电比色计8

四、紫外分光光度法12

(壹) 单组分的测定12

(贰) 多组分混合物的测定13

(叁) 紫外分光光度计16

五、应用17

第三节 比浊法和散射测浊法18

一、 定量原理18

二、影响散射光强度的因素19

三、仪器简介19

四、应用19

五、测定时注意点20

第四节 分子荧光光谱法21

一、 分子的激发光谱和荧光光谱21

四、光电荧光计和荧光分光光度计22

三、影响荧光强度的因素22

二、定量关系和测定方法22

五、应用23

六、测定时注意点24

第五节 原子吸收和火焰发射光谱法25

一、原子吸收光谱法25

(壹) 基本原理26

(贰) 定量关系和测定方法27

(叁) 应用28

二、火焰发射光谱法28

(贰) 干扰与消除29

(壹) 定量关系29

(叁) 应用30

第贰章 电化学分析技术32

第一节 离子选择电极分析法32

一、离子选择电极分析法的基本原理和分类32

(壹) 离子选择电极的基本原理32

(贰) 离子选择电极的分类33

二、基本的离子选择电极33

(壹) 晶体电极33

(贰) 非晶体电极34

(壹) 气敏电极35

三、敏化的离子选择电极35

(贰) 酶电极36

四、离子选择电极的性能37

(壹) 电极的响应范围及检测下限37

(贰) 电极的选择性37

(叁) 响应斜率和转换系数38

(肆) 电极寿命38

五、参比电极38

(壹) 甘汞电极38

六、离子选择电极法的测量仪器39

(贰) 银-氯化银电极39

(贰) 标准曲线法40

(叁) 标准比较法40

七、离子选择电极的定量方法40

(肆) 标准加入法41

八、离子选择电极分析方法的误差41

(壹) 电位的测量41

九、离子选择电极法的应用实例42

(贰) 血清中钾的含量测定42

(壹) 血清中钠的含量测定42

(肆) 滞后效应42

(叁) 温度42

(贰) 溶液的pH值42

第二节 阳极溶出伏安法43

一、电解过程44

(一)分解电位44

(二)超电位45

二、极谱分析简介45

(壹) 极谱仪与极谱图45

(贰) 极谱分析的干扰因素及其消除46

(壹) 预电解——富集47

三、阳极溶出法的基本原理47

(贰) 休止期48

(叁) 溶出过程48

四、阳极溶出法的工作电极48

(壹) 悬汞电极48

(贰) 汞膜电极48

(肆) 比较标准法49

(壹) 血清中铜的测定49

陆、 应用实例49

(叁) 标准加入法49

(贰) 标准曲线法49

五、定量方法49

(贰) 血清中锌的测定50

第叁章 层析技术51

第壹节 概论51

(贰) 层析峰52

(壹) 流出曲线和层析图52

二、层析法中常用的术语52

(贰) 按层析的原理分类52

(叁) 按操作形式不同分类52

(壹) 按两相所处的状态分类52

一、 层析法的分类52

(叁) 基线53

(肆) 保留值53

(伍) 峰高和峰面积53

(陆) 层析峰区域宽度53

(壹) 分离度54

三、层析法的基本理论54

(贰) 柱选择性55

(叁) 柱效56

(肆) 影响分离度的因素57

四、层析法的特点57

第贰节 线层析法及薄层层析法58

一、 基本原型58

(陆) 展开方式的影响59

(伍) 纸质的影响59

(叁) pH值对Rr值的影响59

(肆) 温度的影响59

(贰) 流动相对Rr值的影响59

(壹) 物质的化学结构59

二、影响Rr值的因素59

三、纸层析法的实验技术60

(壹) 样品的预处理60

(贰) 滤纸的选择60

(叁) 点样60

(肆) 展开剂的选择60

(柒) 定性分析62

(陆) 显色定位62

(伍) 展开62

(捌) 定量分析63

四、反相层析法63

五、薄层层析法的实验技术64

(壹) 固定相与流动相及其选择64

(贰) 薄层层析法操作技术64

(叁) 薄层层析法的定性及定量65

(肆) 应用65

第三节 离子交换层析法65

二、离子交换过程66

(贰) 离子交换纤维素66

三、离子交换层析技术67

(壹) 离子交换剂的选择67

(贰) 交换剂的处理、再生与转型67

(叁) 柱的选择67

(肆) 装柱及加样67

(伍) 洗脱与梯度洗脱68

四、离子交换层析的应用69

第四节 凝胶层析法69

一、基本原理69

二、凝胶的种类和性能70

(壹) 葡聚糖凝胶70

(贰) 聚丙烯酰胺凝胶71

(叁) 琼脂糖凝胶72

(肆) 混合性凝胶73

(贰) 凝胶的选择74

(叁) 静水压、Vo和Vi的比值74

(四) 样品的浓度和体积74

(壹) 柱直径与长度74

三、凝胶层析中应注意的几个问题74

(叁) 用于分离提纯75

(贰) 高分子溶液的浓缩75

(肆) 用于测定高分子物质的分子量75

四、凝胶层析的应用75

(壹) 去盐75

第五节 气相层析法76

一、气相层析的一般流程76

二、层析柱76

(壹) 固定液76

(贰) 载体78

三、检测器79

五、程序升温技术80

(壹) 定性分析80

六、定性和定量分析方法80

四、样品的衍生化80

(贰) 瞬时甲基化80

(壹) 硅烷化法80

(贰) 定量分析81

第六节 高效液相层析法84

一、概述84

二、高效液相层析仪84

(贰) 液液分配层析法85

(壹) 液固吸附层析法85

一、离子交换剂85

三、高效液相层析法的类型及其应用85

(叁) 离子交换层析法86

(肆) 梯度洗脱87

第七节 亲和层析法87

一、 概述87

(贰) 配基88

(叁) 配基的固相化88

(壹) 基质88

二、吸附剂的制备88

三、亲和层析分离91

(壹) 装柱和平衡91

(贰) 亲和吸附或亲和结合91

(叁) 亲和物洗脱91

(肆) 再生92

第肆章 电泳技术93

第壹节 基本原理和影响电泳迁移率的因素93

一、 基本原理93

(叁) 溶液的离子强度94

(贰) 溶液的pH值94

(壹) 电场强度94

二、影响电泳迁移率的因素94

(肆) 电渗95

第贰节 区带电泳技术95

一、 滤纸电泳96

二、薄层电泳96

(壹) 醋酸纤维素薄膜电泳96

(贰) 淀粉凝胶电泳97

(壹) 琼脂或琼脂糖凝胶电泳97

三、凝胶电泳97

(贰) 硅胶、氧化铝等的薄层电泳97

(叁) 聚丙烯酰胺凝胶电泳98

第叁节 几种电泳新技术102

一、 等电聚集电泳102

(壹) 基本原理102

(贰) 两性电解质载体及支持介质103

二、转移电泳104

(贰) 重力106

(壹) 离心力106

一、 离心分离的原理106

第伍章 离心技术106

第壹节 离心理论106

(叁) 介质的摩擦阻力107

(肆) 浮力107

二、沉降系数108

三、相对离心力和离心时间108

四、离心机和转子的种类109

第贰节 离心分离的种类109

(壹) 速度区带离心法110

一、 差速离心法110

二、密度梯度离心法110

(贰) 预制梯度等密度离心法113

(叁) 自成梯度等密度离心法113

三、离心法中转子及离心营的选择114

(壹) 离心转子的选择114

(贰) 离心管的种类和性能114

(贰) 限制性核酸内切酶117

二、核酸分子杂交的重要材料117

(壹) 样品核酸117

第壹节 核酸分子杂交技术117

第陆章 核酸分子杂交技术及其应用117

一、 核酸杂交的结构基础117

(叁) 探针118

三、几种常用的核酸分子杂交技术120

(壹) Southern印迹技术120

(贰) Northern印迹技术122

(叁) 斑点杂交122

(肆) 原位杂交122

第贰节 核酸分子杂交在遗传病诊断中应用122

三、DNA分析方法123

(壹) 直接法123

一、 基因诊断基本原理123

二、人体细胞DNA提取、纯化与纯度鉴定123

(贰) 间接法125

第叁节 核酸分子杂交技术在检测病毒及寄生虫感染中的应用127

一、 病毒的检测127

(壹) 病毒核酸的提取127

(贰) 病毒核酸的检测128

二、寄生虫感染的检测128

(贰) 分立式自动生化分析仪129

(壹) 流动式自动生化分析仪129

第柒章 生化检验中的自动化129

一、 按反应装置的结构分类129

第壹节 自动生化分析仪的种类129

二、按同时可测项目分类130

三、按仪器的复杂程度和功能分类130

四、按测定程序可否改变分类130

第贰节 自动生化分析仪的结构特点和工作原理131

一、 流动式生化分析仪131

(壹) 空气分段系统131

(贰) 流动注入的非分段系统133

(叁) 间歇非分段系统134

二、分立式自动生化分析仪134

(壹) 典型分立式分析仪134

(贰) 袋式自动生化分析仪135

(叁) 离心式自动生化分析仪135

第叁节 各类自动生化分析仪的功能特点和选用136

一、 自动化程度137

二、分析效率137

一、 生物学测定法138

三、工作范围138

四、准确度及其它138

第壹节 酶活力测定的基本知识139

第二篇生物化学检验中的酶学知识139

第捌章 酶活力测定的一些理论问题139

(壹) 酶促反应的两个阶段140

一、 酶促反应的时间时程140

(贰) 酶反应进程曲线和酶浓度曲线141

二、按反应时间分类的酶活力测定方法141

(壹) 定时法142

(贰) 连续监测法142

(壹) 酶单位143

三、酶活力的表示法和计算143

(叁) 平衡法143

(贰) 酶活力单位的计算144

第贰节 影响酶活力测定的一些技术因素147

一、 样品处理的影响147

(壹) 溶血147

(贰) 抗凝剂147

(叁) 样品储存147

(壹) 温度148

二、测定条件的影响148

(肆) 样品稀释148

(贰) pH150

(叁) 缓冲剂150

第壹节 基本动力学152

一、 概说152

第玖章 生物化学检验中的酶动力学152

二、米孟氏动力学公式153

(壹) 根据快速平衡学说推导153

(贰) 根据恒态学说推导154

(壹) Km155

三、动力学参数的意义和应用155

(贰) Km和kcab的意义156

四、Km和Vm 的求取157

(壹) 双倒数作图法157

(贰) 其他作图法158

第贰节 双底物动力学158

一、 双底物反应机制的分类158

(壹) 顺序机制158

(贰) 乒乓机制159

二、双底物动力学公式及参数的求取160

(壹) 动力学公式160

(贰) 动力学参数的求取164

（一）计算v/Vm165

（二）求取一定的v/Vm时两种底物的浓度和最佳比例165

三、双底物动力学公式在酶活力测定中的应用165

第叁节 可逆抑制作用动力学168

一、 同位抑制作用的主要动力学类型168

(壹) 竞争性抑制168

(贰) 反竞争性抑制169

(叁) 非竞争性抑制171

(肆) 混合性抑制173

(壹) Dixon作图法174

二、抑制常数的求取174

(贰) 二次作图法175

三、底物抑制和产物抑制176

(壹) 底物抑制176

(贰) 产物抑制177

第壹拾章 酶学分析179

第壹节 工具酶179

一、 工具酶的概念179

二、常用工具酶及指示反应180

(贰) NAD(P)+或NAD(P)H偶联的脱氢酶及其指示反应180

(叁) 偶联H2O2的工具酶及其指示反应181

三、工具酶的质量要求183

第贰节 酶学分析的类型184

一、 代谢物浓度的酶学分析184

(壹) 终点法184

(贰) 动力学法186

二、酶活力测定的酶学分析187

(壹) 偶联反应的基本动力学187

(贰) 工具酶用量的计算188

一、 固相酶的概念及特点190

二、固相化方法概述190

(壹) 吸附法190

(贰) 包埋法190

(叁) 载体共价结合法190

(肆) 酶分子间共价交联190

第叁节 固相酶190

(壹) 固相酶柱191

四、固相酶在生化检验中的应用191

(壹) 反应专一性191

(贰) 最适温度和最适pH191

三、固相酶的性质191

(叁) 底物亲和性191

(贰) 固相酶管192

(叁) 固相酶膜192

二、同工酶的分类193

(贰) 原级同工酶193

一、 酶的多种分子形式和同工酶的定义193

第壹节 同工酶的概念193

第十一章 同工酶的分离与鉴定193

(叁) 同一基因不同mRNA的同工酶195

(肆) 次生性同工酶195

第贰节 同工酶分离鉴定的常用方法196

一、 电泳法196

(壹) 区带电泳法196

(四)评价201

(三)凝胶层析法201

(二)亲和层析法201

(一)离子交换层析法201

二、层析法201

(贰) 等电聚焦电泳201

三、免疫学法202

(壹) 免疫抑制法202

(贰) 免疫沉淀法202

(叁) 免疫测定酶蛋白法203

(伍) 利用某型同工酶特异性抑制剂204

(肆) 利用不同型同工酶对底物的专一性和亲和性不同204

四、动力学法204

(陆) 联合利用同工酶的不同最适pH和不同底物K205

(柒) 评价205

五、热失活法205

第三篇常用生物化学检验的原理和评价207

第壹拾壹章 血液蛋白质的测定207

第壹节 血清总蛋白、白蛋白、球蛋白测定207

一、 总蛋白测定207

(贰) 直接测定甘油法208

三、血清甘油三酯的正常参考范围208

(壹) 双缩脲法208

(贰) 酚试剂法208

(肆) 染料结合法209

(叁) 紫外分光光度法209

二、白蛋白测定210

(陆) 折光测定法210

(壹) 盐析法210

(伍) 比浊法210

(贰) 染料结合法211

三、球蛋白测定211

第贰节 纤维蛋白原测定212

一、 凝血酶法212

二、盐析法212

第叁节 粘蛋白的测定212

三、比浊法212

一、 糖化血红蛋白的测定213

第肆节 糖化血红蛋白和血浆蛋白的测定213

(壹) 比色法214

(贰) 电泳及等电聚焦法214

(叁) 离子交换层析法214

二、糖化血浆蛋白的测定215

(肆) 亲和层析法215

(壹) TBA法216

(贰) NBT法216

(叁) 亲和层析法216

第伍节 血浆游离血红蛋白216

第壹节 氨基酸测定218

(壹) 比色法218

(贰) 滴定法218

一、 氨基酸总量的测定218

第十三章 氨基酸及其代谢产物的测定218

二、氨基酸分别测定219

(壹) 层析法分离体液氨基酸219

(贰) 个别氨基酸及其代谢物的测定222

第贰节 尿素氮测定225

一、 二乙酰一肟法(直接法)225

二、尿素酶法(间接法)226

(壹) 纳氏试剂显色法226

(贰) 酚一次氯酸盐显色法226

(叁) 酶联法226

(肆) 干片定量法227

第叁节 尿酸测定228

一、 氧化还原法228

(壹) 磷钨酸法228

二、尿酸酶法229

(贰) 酶联比色法229

(贰) 杂菲铁法229

(壹) 紫外分光法229

(叁) 酶联-紫外分光法230

一、 肌酐测定231

第肆节 肌酐与肌酸测定231

(壹) Jaffe反应法231

(贰) 酶联法232

第伍节 血氨测定233

一、 纳氏试剂显色法233

(贰) 酶联法233

(壹) Jaffe反应法233

二、肌酸测定233

二、酚-次氯酸盐显色法234

三、酶法234

第十四章 体液酶测定236

第壹节 乳酸脱氢酶的测定236

一、 LDH测定法的原理237

(壹) 比色法237

(贰) 分光光度法237

二、LDH测定法的评价237

第贰节 Υ-谷氨酰转移酶测定238

一、 α-萘胺定时比色法238

二、对-硝基苯胺连续监测法239

一、 转氨酶测定的原理240

第叁节 转氨酶测定240

(壹) 谷草转氨酶240

(贰) 谷丙转氨酶241

(壹) 比色法的评价242

二、转氨酶测定法的评价242

(贰) 酶联一紫外连续监测法的评价243

第肆节 肌酸激酶测定244

一、 比色法245

(壹) 利用顺向反应245

(贰) 利用逆向反应245

二、紫外分光光度法246

三、荧光法247

第伍节 脂肪酶测定247

一、 滴定法248

二、比浊法248

第陆节 胆碱酯酶测定248

一、 以乙酰胆碱为底物249

(贰) 指示剂测pH法249

(叁) 剩余底物测定法——羚胺三氯化铁法250

二、丁酰硫代胆碱法250

第柒节 磷酸酶测定251

一、 碱性磷酸酶251

(贰) 磷酸苯二钠法252

(壹) β-甘油磷酸钠法252

(叁) 磷酸对-硝基酚法253

(肆) 磷酸百里酚酞法254

二、酸性磷酸酶255

第捌节 5′-核苷酸酶测定256

一、 测磷酸盐法256

二、测腺苷法257

第玖节 α-淀粉酶测定257

一、 淀粉酶测定法的原理258

(壹) 碘淀粉比色法258

(贰) 小分子糖产物测定法258

(叁) 染色淀粉法259

二、淀粉酶底物和测定法的评价260

(壹) 底物问题260

(贰) 测定法的评价260

(壹) 氧化亚铜法262

一、无机化学试剂法262

第十五章 糖类及其代谢产物的测定262

第一节 葡萄糖的测定262

(贰) 铁氰化钾法263

二、邻甲苯胺法264

(壹) 氧速率法265

三、葡萄糖氧化酶法265

四、己糖激酶法266

(贰) 偶联比色法266

五、固相酶多层干片法267

第二节 乳酸测定267

一、Barker与Summerson法267

二、乳酸脱氢酶法268

第叁节 丙酮酸测定268

一、 比色法268

二、乳酸脱氢酶法269

第肆节 D-木糖测定269

一、 血清总胆固醇测定271

第壹节 血清总胆固醇及胆固醇酯测定271

(壹) 化学试剂显色法271

第十六章 血脂和血浆脂蛋白测定271

(贰) 酶分析法273

二、血清胆固醇酯测定274

第贰节 血清高密度脂蛋白胆固醇测定275

三、血清总胆固醇的正常参考值275

第叁节 血清甘油三酯测定277

一、 化学试剂法277

(壹) 甘油三酯的溶剂提取277

(贰) 甲醛的测定方法277

二、酶分析法279

(壹) 甘油激酶法279

第肆节 血清载脂蛋白测定281

一、 测定方法281

(壹) 电泳法281

(贰) 免疫法282

二、载脂蛋白免疫分析法中存在的问题282

(壹) 抗原问题282

(贰) 抗体问题283

(叁) 参考标准问题283

第十七章 卟啉及其前体、胆色素以及肝排泄性染料的测定284

第壹节 卟啉及其前体的测定284

一、 卟啉的测定方法285

(壹) 过筛定性测定性285

(贰) 定量测定法285

二、卟啉前体的测定286

(壹) 尿中卟胆原过筛试验286

(贰) ALA和卟胆原的定量测定287

一、 胆红素测定288

(壹) 重氮反应法288

第贰节 胆红素及其代谢产物测定288

(贰) 分光光度法289

二、胆素原及胆素化合物测定290

(壹) 胆素原或胆素化合物的显色反应290

(贰) 尿或粪中胆素原的欧氏反应测定法290

第叁节 肝对染料的排泄试验291

一、 磺溴酞钠滞留试验291

(贰) 作磺溴酞钠滞留试验时的注意事项292

(壹) BSP的测定方法292

二、?青绿滞留试验293

第十八章 血pH测定与血气分析294

第一节 血pH和CO2分压测定294

一、 基本理论294

贰、 血pH电位测定法295

(壹) 原理295

(贰) 方法296

(壹) 原理296

三、血Pco2测定296

(叁) 血pH的正常参考范围296

(贰) 方法296

(叁) 血Pco2的正常参考范围298

叁、 派生引出的参数298

(壹) 血浆实际碳酸氢盐298

(贰) 血浆标准碳酸氢盐298

(叁) 血浆CO2总量298

(肆) 缓冲碱298

二、血浆CO2总量测定量气法299

一、 血浆碳酸氢盐滴定法299

(伍) 碱超或碱欠299

第壹节 血浆二氧化碳测定法299

第贰节 血氧测定300

一、 血氧分压测定301

(壹) 原理301

(贰) 方法301

二、血氧饱和度测定302

三、Pso测定303

四、血氧含量与氧结合量测定——量气法304

(一)荧光测定法306

第壹节 肾上腺髓质及其代谢产物的测定306

一、 血浆儿茶酚胺的测定306

第壹拾玖章 激素及其代谢产物的测定306

(二)放射酶学测定法308

二、尿液中儿茶酚胺及其代谢产物的测定308

(壹) 变肾上腺素(ME)和3-去甲变肾上腺素(NME)测定309

(贰) vMA的测定309

第贰节 肾上腺皮质激素测定310

一、 血浆皮质醇荧光测定310

(贰) 尿液17-酮类固醇的测定311

(壹) 尿液17-羟类固醇测定311

二、尿液皮质类固醇测定311

(叁) 尿液17-生酮类固醇的测定312

第叁节 甲状腺激素的测定313

一、 竞争性蛋白结合分析法313

(壹) 原理313

(贰) 一些影响因素313

二、放射免疫分析法314

(叁) 抗原的标记314

(肆) 测定中的一些问题314

(伍) 正常参考范围315

三、非同位素免疫分析法315

(壹) 间接法316

(贰) 直接法317

第肆节 蛋白质和肽类激素测定317

二、放射免疫分析法318

三、放射受体分析法318

(壹) 基本原理318

(叁) Scatchard作图法319

(贰) 测定中的一些问题319

四、免疫放射分析法320

第二十章 临床生物化学检验的质量控制322

第贰节 与质控有关的若干名词322

一、 除误差以外的若干重要名词322

二、误差323

第叁节 质控材料和质控图的使用323

一、 质控材料323

(壹) 第一参考物质323

二、质控图及其使用324

(壹) Levy-Jenning质控图324

(贰) 第二参考物质324

(叁) 质控物质324

(贰) Westgard质控处理规则326

(叁) 分析失控时的处理326

第肆节 临床生化检验的室间质量评价327

一、 室间质量评价的组织形式327

二、室间质量评价的步骤和统计方法327

(壹) 室间质量评价活动的具体步骤327

(贰) 室间质量评价结果的统计方法327