《表1 苹果内参基因EF-1α和苹果病毒检测引物信息》

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《变温热处理与茎尖培养相结合在苹果砧木组培苗脱毒中的应用》


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选用EF-1α、ACLSV、ASGV、ASPV和apscarviroids引物对苹果砧木系NY2和QD-V-2组培苗进行检测,以含相应病毒的质粒DNA为阳性对照、以ddH2O为阴性对照。PCR反应体系为25μL:2.5mmol/L d NTPs 1.0μL,10×PCR Buffer 2.5μL,Taq DNA聚合酶(2.5 U/μL)0.25μL,正、反向引物各0.5μL,反转录产物2.0μL,用ddH2O补足至25μL。PCR反应循环参数:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,退火温度和延伸时间参照表1,循环30次;72℃延伸10 min。PCR产物用1.2%琼脂糖凝胶进行电泳。