《表1 本研究所用引物：苹果茎痘病毒内蒙古分离物基因组序列和生物学特征研究》

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《苹果茎痘病毒内蒙古分离物基因组序列和生物学特征研究》

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注：a V=A+C+G；D=A+T+G；B=T+C+G；H=A+T+C；W=A+T；K=T+G；Y=C+T；R=A+G，b结合位点主要涉及的分离物为ACLSV（NC001409），ASGV（D14995），ASPV(AB045371；NC003462）。

参照已经公布的17个ASPV基因组序列设计了7对用于ASPV-NM全长基因组扩增引物（表1），以cDNA为模板进行PCR扩增，反应混合物为25μL（同1.3），采用SMARTerTM RACE试剂盒（Clontech，USA）扩增ASPV-NM基因组5′与3′端，操作参考说明书。PCR产物用1.0%琼脂凝胶电泳检测、回收。回收产物与pTOPO vector(Aidlab，China）连接，连接产物转入E.coli DH5α感受态细胞中（TaKaRa），均匀涂布于含50 mg·L-1 Amp的LB固体培养基上，37℃培养过夜。随机挑选白色单克隆菌落过夜摇菌培养，对PCR鉴定为阳性的菌液提取质粒，质粒中酶切结果为阳性的送上海生工生物技术有限公司进行测序，每个片段送3个阳性质粒，对测序结果采用Vector NTI Advance11软件进行校正和拼接。