《表1 本研究所用引物：大口黑鲈弹状病毒的分离培养及其卵黄抗体的制备》

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《大口黑鲈弹状病毒的分离培养及其卵黄抗体的制备》

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取10尾患病大口黑鲈鱼苗置于冰上研磨，采用TRIZOL试剂提取组织总RNA，参考雷燕等（2015）的方法，进行RT-PCR检测，扩增产物送苏州金唯智生物科技有限公司测序。经PCR检测后，取感染MSRV的大口黑鲈鱼苗，匀浆后离心，取上清液，过滤除菌，滤液即为粗提的病毒原液。采用草鱼卵巢细胞株CO细胞作为大口黑鲈弹状病毒的敏感细胞，以含10%胎牛血清的M199完全培养基培养CO细胞至汇片60%～80%时，上述病毒粗提液用M199基础培养基1∶5倍稀释后感染细胞，吸附1.5～2 h后，吸出未吸附病毒液，添加M199维持液继续培养48～72 h，出现细胞病变50%以上，收获病毒的细胞培养物，置于–80℃保存备用。此外，根据已公布的MSRV核酸序列（GenBank No:MK397811）设计引物，扩增特异性产物构建质粒，用于制备定量检测病毒核酸的标准品。同时，设计用于荧光定量PCR检测病毒核酸、内凝集素（intelectin）和内参的引物。所用引物具体信息见表1。