《表1 本研究所用引物：甜菜夜蛾卵黄原蛋白受体基因的RNA干扰》

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《甜菜夜蛾卵黄原蛋白受体基因的RNA干扰》

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下划线表示T7RNA聚合酶启动子T7RNA polymerase promoter is underlined

根据笔者实验室前期已发表的甜菜夜蛾VgR的全长序列（GenBank登录号:KT899978）[18]，利用Primer5.0软件在VgR基因功能区设计引物VgR-F和VgR-R。以甜菜夜蛾c DNA为模板扩增VgR特异性片段。绿色荧光蛋白基因（GFP）片段通过特异性引物（表1）从笔者实验室保存的GFP质粒上扩增。PCR反应程序:94℃预变性3 min，然后按照94℃45 s，60℃30 s，72℃20 s，进行35次循环反应，最后于72℃延伸10 min。通过琼脂糖凝胶电泳分离Vg R与GFP的PCR产物，并用胶回收试剂盒（Axygen）纯化回收目的DNA片段。目的片段与p MD-19T载体（Ta Ka Ra）连接，经PCR筛选阳性克隆后，通过AxyPrep质粒小量制备试剂盒（Axygen）提取质粒送上海生工生物工程有限公司测序。利用DNAMAN软件分析该基因序列的准确性，测序正确的质粒为pMD-19T-Vg R与pMD-19T-GFP。