《表1 本研究所用引物及其序列》

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《通过优化gRNA设计提高CRISPR/Cas9系统中基因编辑效率的方法》

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注:引物序列中小写字母为BbsⅠ限制性内切酶的黏性末端接头

利用g RNA-G1构建了miR167a的pP1C.1C突变载体，对番茄子叶进行遗传转化，获得了具有卡那霉素抗性的愈伤组织116个，其中有荧光标记的愈伤组织5个，将它们命名为G1-1、G1-2、G1-3、G1-4和G1-5。提取这5个愈伤组织的DNA，用1.1-2F/1.1-2R（表1）鉴定是否成功整合T-DNA区，结果表明，所检测的组织载体已成功转入植物愈伤组织中（图6）。扩增靶标序列，PCR产物测序结果表明G1-1和G1-4的测序结果中靶标区域峰图与野生型植株峰图一致，未出现多峰现象；G1-2、G1-3和G1-5的测序结果中靶标区域出现多峰现象（图7）。