《表1 所用引物序列信息：小西葫芦黄花叶病毒山东南瓜和丝瓜分离物全基因组序列分析》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《小西葫芦黄花叶病毒山东南瓜和丝瓜分离物全基因组序列分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

注:*表示用于5′RACE扩增5′末端序列所需要的引物，其序列参考Scotto-Lavino等（2006）的报道。

根据NCBI数据库中ZYMV CP基因的保守序列设计特异性引物（表1）。分别取有明显病毒病症状的南瓜和丝瓜叶片0.1 g，放入预冷的研钵，在液氮中研磨至粉状后转移至灭菌的2.0 m L离心管。利用TransZol法提取植物总RNA。以Oligo（dT）18和随机引物（5′-NNNNNN-3′）对获得的总RNA进行反转录合成cDNA。在0.2 mL离心管中分别加入提取的植物总RNA 5.0μL、Oligo（dT）18和随机引物各1.0μL、ddH2O 5.0μL，置于70℃孵育10 min后迅速转移至冰上放置2 min以上。在上述反应液中加入5×反转录缓冲液4.0μL、10 mmol·L-1 dNTPs 1.0μL、反转录酶M-MLV（200 U·μL-1）0.5μL、RNA酶抑制剂（RRI）1.0μL后30℃孵育10 min、42℃1 h、70℃15 min，反应结束后将获得的cDNA置于–20℃保存。以获得的cDNA为模板，利用ZYMV特异性引物ZYMV-CP-F8540/ZYMV-CP-R9324进行PCR扩增，退火温度参照表1。利用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结果。