《表1 参考毒株信息：犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析》

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《犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析》

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根据GenBank收录的CPV全基因组VP2部分保守序列（登录号:KR002805.1），用Primer Premier 6.0软件设计引物，引物序列为:上游引物p3:5′-CATGAGTCATGGAGCAGTTC-3′；下游引物p4:5′-CTATGTTAATATAATTTTCT-3′，预期扩增片段大小1 755bp。引物由广州华大基因公司合成。PCR反应体系25μL:模板DNA 1μL，2×Easy Taq PCR Supper Mix 12.5μL，上、下游引物各0.5μL，灭菌蒸馏水10.5μL。PCR扩增条件:95℃预变性30s；95℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸30s，共34个循环；72℃延伸10min。回收PCR产物并与pMD18-T载体连接，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，随后将鉴定为阳性的重组菌送华大基因公司进行测序。测序结果拼接后用Megalign version 7.1.0（44）软件与GenBank已登录的标准毒株（CPV-b、V154和LCPV-V204）、国内分离株及3个主流疫苗厂家官方公布序列Merial/vaccine/06（梅里亚）、Intervet/vaccine/06（英特威）及Pfizer/vaccine/06（辉瑞）进行比对分析，参考毒株信息见表1。