《表1 候选内参基因引物基本信息》

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《红梨实时荧光定量PCR内参基因的筛选》

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对于内参基因序列，通过qRT-PCR引物设计网站（http://www.genscript.com/ssl-bin/app/primer）进行引物设计，引物信息如表1所示。设计引物要求扩增子长度在75～300 bp左右，并尽可能避免产生二级结构。引物由北京六合华大基因科技有限公司合成。引物特异性检测选用红梨果皮各样本RNA混合样进行反转录，参照1.2.2方法。以所得cDNA为模板进行PCR扩增，PCR反应体系（25μL）:Premix Taq（TaKaRa TaqTMVersion 2.0）12.5μL，上下游引物（10μmol/L）各1μL，cDNA 1μL，ddH2O 9.5μL；扩增程序为:94℃预变性4 min；94℃变性40 s，54℃退火40 s，72℃延伸40 s，35个循环；72℃终延伸10 min。所得产物通过琼脂糖凝胶电泳进行引物特异性检测。