《表1 用于定量PCR检测的引物与探针》

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《异育银鲫养殖环境典型病原微生物检测和细菌群落解析》

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根据文献[18-23]报道的相关病原菌特异性引物序列（表1）进行常规PCR扩增反应，扩增产物用1.0%的琼脂糖凝胶电泳验证目的条带大小，并利用E.Z.N.A?Gel Extraction Kit进行切胶回收纯化。纯化后的PCR产物与pGEM-T Easy载体连接后导入感受态细胞DH5α，涂布筛选阳性克隆。经PCR鉴定为阳性的克隆子转入LB液体培养基扩大培养，取1.5 mL培养菌液送测序公司对插入基因片段进行鉴定，测序结果通过NCBI的BLAST（http://www.ncbi.nih.gov/blast/）进行序列同源性检索比对。利用E.Z.N.A.?Plasmid Mini Kit I Spin Kit提取质粒DNA，并测定浓度，根据质粒浓度计算基因拷贝数。将已知拷贝数的质粒l0倍梯度稀释作为标准模板，进行荧光定量PCR扩增。