《表1 PCR及荧光定量PCR中引物/探针》

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《云南省两医疗机构腹泻儿童腺病毒感染分子生物学特征》

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取0.1g粪便或0.1ml水样便于1ml磷酸盐缓冲液中，涡旋振荡混匀，12 000×g离心3min后，取上清液提取核酸。病毒核酸提取使用美国ABI公司Mag MAX Express24型自动核酸提取仪，使用QIAGEN Probe RT‐PCR Kit试剂盒，通过实时荧光定量PCR方法进行鉴定。反应体系配制方法为：Master Mix 12.5μl，RT‐Mix 0.25μl，20μM F‐primer0.5μl，20μM R‐primer 0.5μl，20μM probe 0.25μl，RNase free water 6μl，5μl模版。按95℃15min；94℃15s，60℃1min，45个循环，Ct值小于35为阳性样本。针对阳性样本对HAd V的六邻体（Hexon）、纤维突蛋白（Fiber）靶向序列进行PCR扩增，扩增产品经过电泳后，条带清晰的扩增产品送上海生工生物公司进行Sanger法双向核酸测序（引物序列见表1）。