《表1 炭疽芽孢杆菌荧光定量PCR引物和探针》

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《一起疑似炭疽疫苗菌株毒力恢复事件中炭疽芽孢杆菌的毒力鉴定与分析》

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注:探针5′端标记报告荧光染料FAM（5-Carboxyfluorescein，5-羧基荧光素），3′端标记淬灭基团BHQ1

采用TaqMan荧光探针法检测炭疽芽孢杆菌染色体上的rpoB基因、质粒pXO1上的pagA基因和质粒pXO2上capC基因[4]，引物及探针序列见表1。待检样本的核酸DNA提取采用NP968-S型全自动核酸提取仪；用水煮的方法制备DNA模板[5]。PCR反应体系中引物及探针浓度均为0.16μmol/L，2×qPCR Mix 12.5μl，模板DNA 1μl，最后加纯水至总体积为25μl。扩增条件采用两步法进行PCR扩增，95℃预变性5 min；95℃10 s，58℃45 s，40个循环。阳性对照采用强毒炭疽芽孢杆菌（菌株编号为201）的全基因组DNA（中国CDC传染病预防控制所提供），阴性对照采用无菌纯水。阳性对照和阴性对照均成立时，Ct值<35，判为阳性；35≤Ct值<38为可疑阳性；Ct值≥38为阴性。