《表2 柑橘黄龙病实时荧光定量PCR反应引物和探针[7]》

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《梅州地区柑橘黄龙病的常规PCR与实时荧光定量PCR检测技术研究与应用》

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常规PCR的扩增体系为25μL，其中DNA模板1.0μL，引物OI1和OI2c各1.0μL，2xPCRmaster Mix12.5μL，dd H2O 9.5μL。反应程序为95℃预变性5 min，95℃变性30 s，退火温度60℃，72℃60 s，共35个循环，72℃延伸10 min。空白对照为dd H2O，阴性对照为梅州市农业科学院柑橘无病毒苗木繁育基地健康植株提取的基因组DNA，阳性对照为带病植株基因组DNA。PCR扩增完成后，取6.0μL扩增产物，以5.0μL DNA Marker(DL 2000，TAKARA）为标记进行1%琼脂糖凝胶电泳，电压100 V，时间35 min。电泳结束后在凝胶成像系统下观察结果，如在1 167 bp(OI1/OI2c为引物）处出现扩增条带，则该样品为阳性，该植株感染黄龙病。