《表2 用于定量PCR检测的病原菌引物》

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《不同再生水灌溉方式对土壤-辣椒系统中细菌群落多样性及病原菌丰度的影响》

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利用门水平细菌菌群引物[11]和病原菌特异性引物对样品基因组DNA进行常规PCR扩增，所用引物如表2所示．扩增产物用1.0%的琼脂糖凝胶电泳验证目的条带大小，并进行切胶回收纯化．纯化后的PCR产物与pGEM-T Easy载体连接后导入大肠杆菌感受态细胞DH5α，平板涂布进行蓝白斑筛选．经PCR鉴定为阳性的菌落转入LB液体培养基扩大培养，取1.5 m L培养菌液送测序公司对插入基因片段进行鉴定，测序结果通过NCBI的BLAST（http://www.ncbi.nih.gov/blast/）进行序列同源性检索比对．利用E.Z.N.A．Plasmid Mini Kit I Spin Kit试剂盒提取质粒DNA，并测定其浓度和纯度．根据质粒DNA浓度计算基因拷贝数，将已知拷贝数的质粒DNA 10倍梯度稀释作为标准模板，进行荧光定量PCR扩增．