《表2 用于定量PCR检测的引物》

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《生物质炭施用对再生水灌溉空心菜根际微生物群落结构及多样性的影响》

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利用门水平细菌菌群引物和病原菌特异性引物对根际基因组DNA进行PCR扩增，引物信息见表2．标准曲线质粒制备参照前期研究报道[10]．根据质粒DNA浓度计算基因拷贝数，将已知拷贝数的质粒DNA 10倍梯度稀释作为标准模板．定量PCR反应体系:10μL TB GreenTMPremix Ex TaqTM（Tli RNase H Plus），上下游引物各0.4μL （10μmol·L-1），模板2μL，加无菌dd H2O补齐至20μL．具体扩增程序如下:95℃预变性30 s；95℃变性5 s，50～60℃退火30 s，72℃延伸30 s，40个循环．熔解曲线条件:以0.5℃·s-1温度递增速率从65～95℃．反应于CFX96 TouchTM荧光定量PCR检测系统上进行，所有反应均设置3个重复，以无菌dd H2O作为阴性对照，每轮反应结束后样品与标准曲线的Ct值进行比较确定目标基因的初始拷贝数．