《表1 茶刺盲蝽候选基因qPCR检测引物的扩增特性》

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《温度和药剂胁迫下茶刺盲蝽内参基因稳定性分析》

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根据茶刺盲蝽转录组注释结果，筛选出分别编码肌动蛋白（Actin）、β-微管蛋白1（β-tubulin1）、核糖体蛋白L13A（ribosomal protein L13A，RPL13A）、延伸因子1α（elongation factor 1 alpha，EF1α）、核糖体蛋白S3A（ribosomal protein S3A，RPS3A）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）、18S核糖体RNA（18S ribosomal RNA，18S RNA）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose 6phosphate dehydrogenase，G6PDH）、真核生物启动因子4A（eukaryotic initiation factor 4A，EIF4A）、TA-TA结合蛋白（TATA-box binding protein，TBP）和多聚泛素酶（ubiquitin-conjugating protein，UBQ）的11个候选基因序列，利用软件Primer Premier 5.0设计引物（表1），经PCR克隆并测序验证后用于后续qPCR检测。引物合成和PCR产物测序均由广州华大基因科技有限公司完成。使用TB GreenTMPremix Ex TaqTMII进行qPCR，检测各基因的mRNA表达水平。20 m L反应体系:2×TB GreenTMPremix Ex TaqTMII10 m L、cDNA模板1 m L、10 mmol/L上下游引物各0.5 m L、ddH2O 8 m L。利用CFX96实时荧光定量PCR仪进行检测，反应条件:95℃预变性30 s；95℃变性5 s，57℃退火和延伸共30 s，在延伸阶段收集荧光信号，40个循环；扩增结束后，在60～95℃进行熔解曲线分析，以检测引物的扩增特异性。每个样品3次技术重复，每个处理3次生物学重复。