《表1 gus基因及内参基因的qPCR引物及扩增参数》

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《三种单子叶植物叶组织中GWSF诱导转录特性》

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GUS染色能一定程度反映GWSF的转录活性，但不能精确地量化转录活性高低。如果选用可信的内参基因，qPCR可快捷、准确地检测基因表达的水平。根据高粱GAPDH基因（XM＿021449347.1）、玉米Ubiquitin基因（NM＿001112080）、小麦TEF 1基因（M-90077.1）和β-葡萄糖醛酸酶基因gus（NC＿000913.3）的序列，设计四个基因的qPCR引物（表1）。分析qPCR结果，GAPDH、Ubiquitin、TEF1和gus基因的融链曲线都只有单一的峰，对应的融链温度分别为84℃、82℃、82℃、87℃，说明扩增过程无引物二聚体产生，设计的引物特异性好。将cDNA 10倍梯度稀释后作qPCR模板，计算各基因的扩增效率。各基因模板浓度与Ct值的线性方程的r2值均大于0.99，GAPDH、Ubiquitin、TEF1和gus基因的扩增效率分别为95%、98%、102%、106%（表1）。