《表3 PCR扩增程序及特异性引物》

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《好氧和缺氧条件下游离亚硝酸对氨氧化菌和亚硝酸盐氧化菌的选择性抑制》

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定量PCR（qPCR）：用1×PBS清洗污泥样品3次，14 000×g离心2 min去除上清液，置于-20°C保存。采用试剂盒对DNA进行提取，提取后的DNA通过NanoDrop One测量核酸浓度及纯度。PCR反应采用试剂盒，反应体系（25μL）:GoTaq Green Master Mix 12.5μL，正、反向引物（10 mmol/L）各1μL，DNA模板0.5-2.0μL，ddH2O补足25μL。PCR反应条件见表3。采用特异性引物对AOB amoA功能基因隶属于NOB菌群的Nitrospira和Nitrobacter以及全菌的16S rRNA基因进行qPCR扩增。反应在QuantStudioTM 7 Flex System实时定量PCR仪上进行，采用试剂盒进行反应，PCR体系（25μL）:SYBR缓冲液12.5μL，正、反向引物（10 mmol/L）各1μL，ROX 0.5μL，DNA模板2μL，ddH2O补足25μL。通过质粒连接、转化、扩大培养、质粒纯化获得质粒。