《表2 PCR扩增引物及程序》

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《DNA条形码在热带龙脑香科树种鉴定中的应用》

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使用变色硅胶快速干燥叶片材料。每次称取30 mg叶片加入液氮研碎，采用改进后的CTAB法（Doyle and Doyle，1987）提取植物总DNA，使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测。以rbcL、matK、trnL-trnF和ITS2作为扩增目的片段，扩增体系（20μL）为:2μL DNA模板，2.0μL 10×PCR Buffer，2.0μL 25 mmol·L-1MgCl2，1.6μL 2.5 mmol·L-1 dNTPs，0.2μL 5 U·μL-1r Taq，12.2μL ddH2O，10μmol·L-1正反扩增引物各1μL。对扩增或测序失败的样品使用高保真聚合酶（TransTaq HiFi DNA Polymerase）进行重复实验，并调整扩增体系为:2μL DNA模板，2.0μL HiFi Buffer I，1.6μL 2.5 mmol·L-1 dNTPs，0.2μL5 U·μL-1 HiFi DNA Polymerase，14.2μL ddH2O。由于matK片段引物通用性较低，实验中使用matK3-F/matK1R与matK-390F/matK-1326R两对引物（Chen et al.，2010）进行扩增。另外，在matK和ITS2扩增体系中添加BSA和DMSO以提高扩增效率。除此之外，由于ITS2片段有较高的GC/AT含量，在扩增失败的样品反应体系中添加5%GC Enhancer。扩增产物送华大基因（广州华大公司）进行双向测序，扩增引物及反应程序见表2。