《表3 绝对Q-PCR的引物序列及扩增程序》

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《瘤胃微生物强化醋糟厌氧消化及其机制》

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b)构建质粒．GH5的特异性引物cel5＿392F和cel5＿754R[13][生工生物工程（上海）股份有限公司]按照表3所示的程序扩增目的基因．扩增体系包括:PCR Master Mix（2×）[生工生物工程（上海）股份有限公司]12.5μL，正、反引物和DNA模板各1μL以及9.5μL dd H2O（双蒸水）[宝生物工程（大连）有限公司]，在MJ MiniTMPCR扩增仪（MJ Mini，美国Bio-Rad公司）上进行反应．PCR产物在1%的琼脂糖凝胶上电泳，切割目的条带，用San Prep柱式DNA胶回收试剂盒[生工生物工程（上海）股份有限公司]回收纯化PCR产物．纯化产物与载体p MD19-T[宝生物工程（大连）有限公司]连接，热击将其导入到大肠杆菌感受态细胞JM109[宝生物工程（大连）有限公司]，LB培养基平板涂布培养12 h，随机挑取白色菌落进行液体扩培，San Prep柱式质粒DNA小量抽提试剂盒[生工生物工程（上海）股份有限公司]提取质粒，并通过PCR验证阳性质粒．